病毒,其遺傳物質可以存儲為記憶RNA(mRNA)而不是DNA。在RNA擴增開始之前,必須首先從污染物質中分離出感興趣的RNA序列。完成后,將酶逆轉錄酶添加到RNA模板中。逆轉錄酶用于創建與原始mRNA互補的堿基對的細胞DNA(cDNA)序列。第一條cDNA鏈可用于創建第二條可用于聚合酶鏈反應的cDNA鏈,一種通過重復的DNA復制循環和隨后的兩條鏈分離來放大DNA鏈的過程。cDNA通常在DNA序列的一端包含引物或酶,作為核苷酸結合的信號,從而產生與原始序列相同的mRNA鏈
RNA片段是大分子。有幾種RNA擴增方法,但產生最大量忠實于原始拷貝的mRNA的方法稱為模板轉換法。這種方法使用Moloney小鼠白血病病毒的逆轉錄酶,它在從RNA模板中產生該鏈后,在第一鏈cDNA的末端添加一個引物區域。該引物區域也被添加到第二條cDNA鏈上,由此產生擴增的RNA拷貝。另一種酶,稱為啟動子,可與第二條cDNA上的引物區域結合,這大大增加了通過轉錄從這個cDNA鏈產生的RNA拷貝的數量。
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