某些食物中含有生物素,例如菠菜。生物素是一種B族復合維生素—維生素B7。它是一種小分子,多個生物素分子可以與一個單抗或多克隆抗體結合。生物素也是水溶性的,這一事實使其在緩沖系統中比不溶于水的情況下具有更大的多功能性。為了獲得更高的特異性,單克隆抗體抗體與生物素的結合通常比多克隆抗體結合更為可取。生物素分子可直接與感興趣的抗體結合,也可以通過分子尾部連接,以獲得更大的運動自由度。生物素配體親和素存在于卵白蛋白中,它可以廉價制造且易于分離。多個親和素分子將與每個生物素受體結合,放大單個抗體檢測信號。當生物素抗體粘附到感興趣的抗原上時,實驗人員可以將復合物暴露于與熒光團結合的親和素中,使復合物可檢測。通過熒光成像,可以在光學顯微鏡下檢測生物素抗體和親和素結合配體,雖然生物素抗體和熒光標記的親和素分子的制備和使用是抗原檢測的常用方法,但仍存在利用生物素/親和素復合物的替代品將生物素與一種類似神經毒素的配體結合,有助于檢測受神經毒素影響的神經元受體的位置,也有可能將生物素與核苷酸序列結合,如信使核糖核酸(mRNA),以發現這些核苷酸序列在哪里被翻譯成蛋白質或檢測細胞mRNA調節。可以購買生物素化多克隆或單克隆抗體,盡管生物素化抗體的生產在許多實驗者的能力范圍內。可以在網上找到建議抗體生物素化方法的協議,雖然最容易遵循的協議直接將生物素與抗體連接起來,而不是建議如何插入分子間隔區。生物素與其相關抗體之間的分子間隔允許更大的間距使更多的分子暴露在結合位點上,而這些生物素抗體通常是購買而不是制造的。
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