Northern印跡雜交是一種用于檢測樣本中信使RNA(mRNA)水平的技術,并對存在的mRNA數量進行量化,northern blot由于其簡單易用而成為標準。northern印跡技術還允許在單個實驗中直接比較多個樣本。 科學家用燒杯信使RNA是一種...
Northern印跡雜交是一種用于檢測樣本中信使RNA(mRNA)水平的技術,并對存在的mRNA數量進行量化,northern blot由于其簡單易用而成為標準。northern印跡技術還允許在單個實驗中直接比較多個樣本。
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科學家用燒杯信使RNA是一種在基因表達時產生的核酸,是一種被轉換的基因在細胞內的功能被轉錄成mRNA。然后,mRNA被運輸到細胞的細胞質中,在那里它被翻譯成蛋白質。因此,對細胞mRNA樣本的Northern印跡分析可以提供有關細胞正在產生的蛋白質陣列的有用信息。在Northern雜交中,從細胞中提取mRNA并通過變性瓊脂糖凝膠電泳,使樣本中的mRNA根據大小進行分離。同時運行已知大小的mRNA分子樣本,以提供對照。一旦電泳完成,樣品轉移并固定在固體膜上,通常由尼龍等材料制成。在分析之前,樣品會暴露在帶有放射性標記的探針上幾個小時。在分析過程中,用x射線可以清楚地檢測到與放射性標記探針雜交的mRNA。northern印跡技術可以觀察不同組織類型之間的基因表達模式。從不同組織和器官類型的細胞中提取的信使RNA可以比較,細胞對壓力的反應,感染,和許多其他刺激可以檢查通過觀察不同條件下mRNA表達的差異,科學家可以確定細胞對某些刺激產生何種類型的蛋白質。這可以為未知蛋白質的功能提供線索,或者在已知蛋白質的情況下,提供有關細胞對刺激反應的信息。例如,northern印跡法可能表明,一種未知蛋白質的表達隨著特定毒素的存在而增加。然后可以推測該蛋白質參與了降低毒性的作用,可能是通過將化學物質從細胞中運輸出去或將其轉化為代謝物。如果已知的蛋白質正在檢查中,則記錄蛋白質表達的變化可以提供反應本身的信息,例如,如果已知分子轉運體的表達增加,就可以證實細胞對毒素的反應是將毒素運輸出細胞。