細菌細胞中通常同時存在多個質粒拷貝在將質粒插入宿主細胞之前,基因克隆涉及許多步驟。首先,要復制的基因必須分離出來,用作載體的質粒也必須分離出來。一旦完成,基因必須插入質粒DNA中,然后將質粒插入細菌宿主細胞中進行復制
所有含有胰島素基因的質粒都被導入細菌中,在那里它們被復制。為了從細菌細胞中分離出質粒,細胞最初必須用酶來分解細菌的細胞壁。較大的染色體DNA是用離心機從較小的質粒中分離出來的。分離出來的質粒DNA現在可以將基因插入其中質粒是由DNA的一個雙鏈環組成的。為了插入所需的基因,質粒DNA被限制性酶切割。這些酶只切割特定核苷酸序列的DNA。一旦質粒DNA被切割,連接子序列被添加到與要插入的基因末端相關的松散末端,這確保了基因精確地與質粒相吻合。一旦基因被插入到質粒中,它現在就可以被插入了一種活的細菌。細菌復制它們的質粒,這樣一個細胞就可以包含許多拷貝。一個細菌中一個質粒可以有多達200個拷貝。如果將質粒導入許多細菌細胞,基因的許多拷貝可以相對快速地產生,特別是細菌細胞每20分鐘復制一次,這是用來制造人類胰島素的過程將編碼胰島素的基因分離并插入到質粒中,然后將所有含有胰島素基因的質粒導入細菌中,在那里進行復制。然后細菌繼續自我復制,因此,數百萬個含有胰島素基因的細胞可以在很短的時間內被創造出來,這個克隆的基因現在為人類胰島素提供了可靠的來源人染色體DNA。
0 篇文章
如果覺得我的文章對您有用,請隨意打賞。你的支持將鼓勵我繼續創作!