蛋白質濃度的測定方法有哪些(Different Methods of Protein Concentration Determination)？

有上百種不同的蛋白質濃度測定方法。生物化學家分析的蛋白質溶液種類的多樣性令人難以置信，這就是為什么沒有一種通用的方法適用于每種類型的蛋白質溶液。最常見的蛋白質分析是布拉德福德法，Lowry分析法和雙辛酸分析法...

有上百種不同的蛋白質濃度測定方法。生物化學家分析的蛋白質溶液種類的多樣性令人難以置信，這就是為什么沒有一種通用的方法適用于每種類型的蛋白質溶液。最常見的蛋白質分析是布拉德福德法，Lowry分析法和雙辛酸分析法。盡管如此，為了解決蛋白質溶液和分析中使用的試劑之間的任何潛在化學不相容性，已經開發了各種各樣的變體。

在一種蛋白質濃度測定方法中，在蛋白質溶液中加入一種與蛋白質結合的有色染料。一般來說，蛋白質濃度測定有兩大類：第一類方法是在蛋白質溶液中加入彩色或熒光染料，它與蛋白質特異結合。結合染料有一個獨特的吸收波長，它與蛋白質的量成正比。通過使用分光計，可以估計蛋白質的濃度。第二組實驗包括在蛋白質溶液中加入銅（II）離子，當這些離子被還原成銅（I）離子時，這些還原的離子就能夠通過與蛋白質結合而形成五顏六色的復合物。通過測量它們獨特波長的吸收率，蛋白質的濃度同樣可以推斷出來。最流行的蛋白質濃度測定方法之一是布拉德福德法。在這種方法中，在酸性條件下，將一種叫做考馬斯亮藍的紅色染料加入到蛋白質溶液中。當這種染料與蛋白質結合時，它形成一種永久性的藍色絡合物，具有595納米的特征吸光度，盡管布拉德福德分析法具有通用性，但它與某些蛋白質溶液不相容特別是，十二烷基硫酸鈉（SDS）的存在會干擾Bradford分析，十二烷基硫酸鈉是一種常用于純化蛋白質和裂解細胞的洗滌劑。這種洗滌劑干擾染料與蛋白質的結合，從而導致不可靠和不準確的吸收讀數。那么，其他類型的方法，必須在SDS存在的情況下使用。已經開發了另一系列的蛋白質分析，它們都涉及雙縮脲試驗的變化。在這個反應中，蛋白質與水基和銅（II）離子結合。這些離子被還原，然后被蛋白質螯合形成彩色絡合物。使用該試驗的兩種分析方法是Lowry試驗和Bicinchonic acid試驗。在Lowry試驗中，在雙縮脲試驗中加入Folin Ciocalteu試劑。Folin Ciocalteu試劑氧化芳香殘基，特別是色氨酸，有助于絡合物在750納米處的強烈吸收。另一方面，雙氰基酸的測定包括在雙縮脲試驗中加入雙辛酸。在大約104°F（40°C）下短暫培養后，兩種當量的酸和蛋白質的肽鍵螯合一個單一的銅（I）離子，其結果是形成一種在562納米處強烈吸收的絡合物。在選擇蛋白質濃度測定方法時，重要的是要考慮溶液中存在的不同化學官能團。某些氨基酸側鏈的存在，二硫鍵和輔因子會使蛋白質濃度的測定變得非常不準確，不僅要考慮蛋白質，還要考慮其他試劑和緩沖液，如還原劑和洗滌劑。理想的方法是化學相容的，而且可靠、廉價和易于建立。