核糖核酸(RNA)定量是測定溶液中RNA平均濃度的一種方法。這種測定可通過多種程序進行,分光光度法通常分為兩類:分光光度法或熒光染料定量法。分光光度法依賴于RNA吸收某些波長的紫外線的能力。一些熒光染料,如溴化乙錠,可以...
核糖核酸(RNA)定量是測定溶液中RNA平均濃度的一種方法。這種測定可通過多種程序進行,分光光度法通常分為兩類:分光光度法或熒光染料定量法。分光光度法依賴于RNA吸收某些波長的紫外線的能力。一些熒光染料,如溴化乙錠,可以與核酸(如RNA)結合,并在結合時發出熒光,使其亮度用于定量核酸的染料將結合DNA和RNA,并且顯示出相似的光度,因此確保RNA樣本的清潔非常重要。當RNA暴露于紫外線下時,它將選擇性地吸收波長為260納米(nm)和280nm的光。此方法在分光光度計可以產生波長的紫外線,測量穿過RNA的光。濃度越高的RNA吸收的光越多。這兩種波長的組合通常用于RNA定量,因為這種方法可以讓研究人員了解樣本是否被其他大分子污染,例如蛋白質。這些污染物通常會選擇性地吸收280nm的光,但在260nm處不會吸收光。因此,計算兩個波長吸收光的比率可以確定污染的程度。使用熒光染料對RNA進行定量分析得到的結果對某些污染物不太敏感,它可以與低水平的RNA一起使用,這會使分光光度法變得不可能如果沒有光度計,可以制備已知RNA濃度的溶液,并將未知樣品的光度與這些溶液進行粗略比較,光度與RNA濃度呈線性關系,因此,研究人員可以根據光度快速測定濃度。使用任何一種方法的RNA定量都對不同的污染物非常敏感。蛋白質、苯酚和大顆粒物都會使分光光度法的結果不準確。這些污染物不會影響熒光染料RNA的定量,但是這種方法可能會因為樣本中存在脫氧核糖核酸(DNA)而變得不準確。結合核酸的染料會同時結合DNA和RNA,并且顯示出相似的光度,因此確保RNA樣本干凈是很重要的。通常的方法是添加一種能破壞DNA的酶,例如DNAse,根據樣品中RNA的濃度和存在的污染物,實驗室可以使用這兩種方法中的任何一種來定量RNA
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發表于 2020-09-06 19:24
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- 分類:科學教育