什么是RNA定量(RNA Quantification)？

核糖核酸（RNA）定量是測定溶液中RNA平均濃度的一種方法。這種測定可通過多種程序進行，分光光度法通常分為兩類：分光光度法或熒光染料定量法。分光光度法依賴于RNA吸收某些波長的紫外線的能力。一些熒光染料，如溴化乙錠，可以...

核糖核酸（RNA）定量是測定溶液中RNA平均濃度的一種方法。這種測定可通過多種程序進行，分光光度法通常分為兩類：分光光度法或熒光染料定量法。分光光度法依賴于RNA吸收某些波長的紫外線的能力。一些熒光染料，如溴化乙錠，可以與核酸（如RNA）結合，并在結合時發出熒光，使其亮度用于定量核酸的染料將結合DNA和RNA，并且顯示出相似的光度，因此確保RNA樣本的清潔非常重要。當RNA暴露于紫外線下時，它將選擇性地吸收波長為260納米（nm）和280nm的光。此方法在分光光度計可以產生波長的紫外線，測量穿過RNA的光。濃度越高的RNA吸收的光越多。這兩種波長的組合通常用于RNA定量，因為這種方法可以讓研究人員了解樣本是否被其他大分子污染，例如蛋白質。這些污染物通常會選擇性地吸收280nm的光，但在260nm處不會吸收光。因此，計算兩個波長吸收光的比率可以確定污染的程度。使用熒光染料對RNA進行定量分析得到的結果對某些污染物不太敏感，它可以與低水平的RNA一起使用，這會使分光光度法變得不可能如果沒有光度計，可以制備已知RNA濃度的溶液，并將未知樣品的光度與這些溶液進行粗略比較，光度與RNA濃度呈線性關系，因此，研究人員可以根據光度快速測定濃度。使用任何一種方法的RNA定量都對不同的污染物非常敏感。蛋白質、苯酚和大顆粒物都會使分光光度法的結果不準確。這些污染物不會影響熒光染料RNA的定量，但是這種方法可能會因為樣本中存在脫氧核糖核酸（DNA）而變得不準確。結合核酸的染料會同時結合DNA和RNA，并且顯示出相似的光度，因此確保RNA樣本干凈是很重要的。通常的方法是添加一種能破壞DNA的酶，例如DNAse，根據樣品中RNA的濃度和存在的污染物，實驗室可以使用這兩種方法中的任何一種來定量RNA

發表于 2020-09-06 19:24
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分類：科學教育

什么是RNA定量(RNA Quantification)？

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